《食品安全国家标准 食品中膳食纤维的测定》膳食纤维测定仪代替GB/T 5009.88-2008《食品中膳食纤维的测定》,部分代替GB/T 22222-2008《食品中膳食纤维的测定酶重量法和酶重量法一液相色谱法》,规定了食品中膳食纤维的测定方法(酶重量法),适用于所有植物性食品及其制品中总的、可溶性和不溶性膳食纤维的测定,但不包括低聚果糖、低聚半乳糖、聚葡萄糖、抗性麦芽糊精、抗性淀粉等膳食纤维组分。
前言编辑本标准代替GB/T 5009.88-2008《食品中膳食纤维的测定》[1],部分代替GB/T 22222-2008《食品中膳食纤维的测定酶重量法和酶重量法一液相色谱法》。本标准与GB/T 5009.88-2008相比,主要变化如下:—标准名称修改为“食品安全国家标准食品中膳食纤维的测定”;—修改了方法适用范围;—增加了膳食纤维、总膳食纤维、不溶性膳食纤维、可溶性膳食纤维的定义;—删除了中性洗涤剂法;—修改了总膳食纤维计算公式;—添加了当食品中含有低分子质量可溶性膳食纤维时总膳食纤维计算方法的注释。
本标准与GB/T 22221-2008相比,主要变化如下:—整合了第一法酶重量法。
范围编辑
本标准规定了食品中膳食纤维的测定方法(酶重量法)。
本标准适用于所有植物性食品及其制品中总的、可溶性和不溶性膳食纤维的测定,但不包括低聚果糖、低聚半乳糖、聚葡萄糖、抗性麦芽糊精、抗性淀粉等膳食纤维组分。术语和定义编辑膳食纤维(DF)
不能被人体小肠消化吸收膳食纤维测定仪但具有健康意义的、植物中天然存在或通过提取/合成的、聚合度DP≥3的碳水化合物聚合物。包括纤维素、半纤维素、果胶及其他单体成分等。可溶性膳食纤维(SDF)
能溶于水的膳食纤维部分,包括低聚糖和部分不能消化的多聚糖等。不溶性膳食纤维(IDF)不能溶于水的膳食纤维部分,包括木质素、纤维素、部分半纤维素等。总膳食纤维(TDF)可溶性膳食纤维与不溶性膳食纤维之和。
原理编辑
干燥试样经热稳定a-淀粉酶、蛋白酶和葡萄糖茸酶酶解消化去除蛋白质和淀粉后,经乙醇沉淀、抽滤,残渣用乙醇和丙酮洗涤,干燥称量,即为总膳食纤维残渣。另取试样同样酶解,直接抽滤并用热水洗涤,残渣干燥称量,即得不溶性膳食纤维残渣;滤液用1倍体积的乙醇沉淀、抽滤、干燥称量,得可溶性膳食纤维残渣。扣除各类膳食纤维残渣中相应的蛋白质、灰分和试剂空白含量,即可计算出试样中总的、不溶性和可溶性膳食纤维含量。
本标准测定的总膳食纤维为不能被a-淀粉酶、蛋白酶和葡萄糖茸酶酶解的碳水化合物聚合物,包括不溶性膳食纤维和能被乙醇沉淀的高分子质量可溶性膳食纤维,如纤维素、半纤维素、木质素、果胶、部分回生淀粉,及其他非淀粉多糖和美拉德反应产物等;不包括低分子质量(聚合度3~12)的可溶性膳食纤维,如低聚果糖、低聚半乳糖、聚葡萄糖、抗性麦芽糊精,以及抗性淀粉等。[2] 试剂和材料编辑注:除非另有说明,本标准所用试剂均为分析纯,水为GB/T 6682规定的二级水。[2] 试剂95%乙醇。丙酮。石油醚:沸程30 ℃~60℃。氢氧化钠。重铬酸钾。三轻甲基氨基甲烷。2-(N-吗琳代)乙烷磺酸。冰乙酸。盐酸。硫酸。
热稳定a-淀粉酶液:CAS 9000-85-5 , IUB 3.2.1.1,10 000 U/mL士1 000 U/mL,不得含丙三醇稳定剂,于0 ℃~5℃冰箱储存,酶的活性测定及判定标准应符合附录A的要求。
蛋白酶液:CAS 9014-01-1, IUB 3.2.21.1, 300 U/mL~100 U/mL,不得含丙三醇稳定剂,于0 ℃~5℃冰箱储存,酶的活性测定及判定标准应符合附录A的要求。
淀粉葡萄糖茸酶液:CAS 9032-08-0,IUB 3.2.1.3,2 000 U/mL~3 300 U/mL,于0℃~5℃储存,酶的活性测定及判定标准应符合附录A的要求。
硅藻土:CAS 688 55-51-9。[2] 试剂配制
乙醇溶液(85%,体积分数):取895 mL 95%乙醇,用水稀释并定容至1L,混匀。
乙醇溶液(78%,体积分数):取821 mL 95%乙醇,用水稀释并定容至1L,混匀。
氢氧化钠溶液(6 mol/L):称取21 g氢氧化钠,用水溶解至100 mL,混匀。
氢氧化钠溶液((1 mol/L):称取1 g氢氧化钠,用水溶解至100 mL,混匀
盐酸溶液((1mol/L):取8.33 mL盐酸,用水稀释至100 mL,混匀。
盐酸溶液(2 mol/L):取167 mL盐酸,用水稀释至1L,混匀。
MES-TRIS缓冲液(0.05 mol/L):称取19.52 g 2-(N-吗琳代)乙烷磺酸和12.2 g三轻甲基氨基甲烷,用1.7工矛水溶解,根据室温用6 mol/L氢氧化钠溶液调pH,20℃时调pH为8.3,21℃时调pH为8.2,28℃时调pH为8.1; 20 ℃~28℃之间其他室温用插入法校正pH。加水稀释至2L。
蛋白酶溶液:用0.05 mol/LMES-TRIS缓冲液配成浓度为50 mg/mL的蛋白酶溶液,使用前现配并于0 ℃~5℃暂存。
酸洗硅藻土:取200 g硅藻土于600 mL的2 mol/L盐酸溶液中,浸泡过夜,过滤,用水洗至滤液为中性,置于525℃士5℃马弗炉中灼烧灰分后备用。
重铬酸钾洗液:称取100 g重铬酸钾,用200 mL水溶解,加入1 800 mL浓硫酸混合。
乙酸溶液((3 mol/L):取172 mL乙酸,加入700 mL水,混匀后用水定容至1L。[2] 仪器和设备编辑高型无导流口烧杯:400 mL或600 mL。
坩埚:具粗面烧结玻璃板,孔径;10μm~ 60 μm。清洗后的坩埚在马弗炉中525℃士5℃灰化6 h,炉温降至130℃以下取出,于重铬酸钾洗液中室温浸泡2h,用水冲洗干净,再用15 mL丙酮冲洗后风干。用前,加入约1.0 g硅藻土,130℃烘干,取出增祸,在干燥器中冷却约1h,称量,记录处理后增祸质量(),精确到0.1 mg。
真空抽滤装置:真空泵或有调节装置的抽吸器。备1L抽滤瓶,侧壁有抽滤口,带与抽滤瓶配套的橡胶塞,用于酶解液抽滤。
恒温振荡水浴箱:带自动计时器,控温范围室温5℃ ~100℃,温度波动士1 ℃ 。
分析天平:感量0.1 m g和1 mg。
马弗炉:525℃士5℃。
烘箱:130℃士3℃。
干燥器:二氧化硅或同等的干燥剂。干燥剂每两周130℃士3℃烘干过夜一次。
p H计:具有温度补偿功能,精度士0.1。用前用pH 1.0、7.0和10.0标准缓冲液校正。
真空干燥箱:70℃士1℃。
筛:筛板孔径0.3 mm~0.5 mm 。[2]